摘要： 为精准检测F亚群禽白血病病毒（ALV?F），该研究针对ALV?F流行毒株env 基因设 计了一对特异性引物F1/F2，建立了ALV?F的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。条件优 化试验结果显示，该方法最适退火温度为64.5 ℃，最适引物浓度为0.4 μM。利用最适反应条 件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525，R2=0.997，扩增效率E=100.8%，重组质粒标准品 拷贝数与Ct 值具有良好的线性关系。特异性试验结果表明，该方法仅能特异性检测ALV?F， 对ALV?A、ALV?B、ALV?J、ALV?K、禽流感病毒（AIV）、马立克病毒（MDV）、网状内皮组织增生病 病毒（REV）和鸡传染性贫血病病毒（CIAV）无交叉反应；敏感试验结果表明，该方法最低检测限 度为4.67×102拷贝/μL，敏感性是普通PCR 的1 000倍；稳定性试验结果表明，批间和批内稳定 性试验的变异系数均小于2%。利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩 山鸡胚所制备的原代细胞（PEF）样品进行检测，结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率 均为95.65%（22/23），而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%（9/23），该方法与普通PCR总 符合率为100%，与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%；进一步利用该方法、病毒分离法（结合 ALV p27 ELISA）和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测，结果显示该方法 和普通PCR 方法阳性检出率分别为100.00%（20/20）和75.00%（15/20），两者总符合率为 75.00%，而病毒分离法阳性检出率为0.00%（0/20）。本研究建立的方法具有良好的特异性、敏 感性和稳定性，能够有效检测临床样品，可以为ALV?F的精准检测提供技术支持。

关键词: 禽白血病；ALV?F；SYBR GreenⅠ荧光定量PCR