摘要： 为了对 E. necatrix ENYS 株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测，该研究对 ENYS 株和 ENGD 株进行全基因组重测序，结合生物信息学分析建立了一种 TaqMan qPCR 检测 技术。结果显示，En?marker5 测序结果与预期相符，最优的引物浓度和探针浓度分别为 500 nM 和 250 nM，标准曲线的斜率为-3.249，相关系数为 0.999，可以通过 Ct 值对模板浓度定量， 该方法检测下线为 290 个拷贝/反应和 50 个卵囊/反应，灵敏度是传统 PCR 的 10 倍；该方法可以 特异性检测 EnYS 株，不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌；重复性检测的变异 系数小于 0.6%，重复性良好。本研究针对 E. necatrix EnYS 株开发了一种灵敏度高、特异性强、 稳定性好的 TaqMan qPCR 检测方法，为 E. necatrix EnYS 株的安全性评估及临床应用提供技术 支持。

关键词: 毒害艾美耳球虫, 减毒活疫苗, 全基因组重测序, 分子标记, TaqMan qPCR