摘要: 传染 性 法 氏 囊 病 病 毒 新 型 变 异 株(Novel variant Infectious bursal disease virus, nVarIBDV)给我国养禽业防控法氏囊带来更大的挑战。目前缺乏快速、灵敏的针对 nVarIBDV 的检测方法。为解决这一问题,该试验根据已发表的 nVarIBD 的 VP2 基因序列,设计了一对引 物和一条特异性 Taq Man 探针,建立了一种 nVarIBD 的 Taq Man 荧光定量 RT?PCR 检测方法,该 方法可通过特异性扩增 nVarIBD VP2 基因来确定样品是否为 IBDV 新型变异株。通过构建重组 质粒 pMD18?T?VP2 对引物和探针进行灵敏性和重复性试验,以及特异性检测,最后使用该检 测方法对临床样品进行验证。荧光定量 RT?PCR 结果显示灵敏性可达 1.32×101copies/μL,高于 常规 RT?PCR 的 100 倍。批内和批间重复试验变异系数(CV)均小于 0.5%,结果表明该检测方 法有良好的重复性与稳定性。该方法与常见禽病毒核酸无交叉反应,说明检测方法具有较好 的特异性。综合本研究结果表明,该研究建立的 nVarIBD 荧光定量 RT?PCR 检测方法特异性 强、灵敏性高、重复性好,可用于临床样品中 IBDV 新型变异株的监测。
中图分类号: