摘要: 为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3) 原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板, 经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是:抗原包被 含量为1 μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶50,孵育时间为45 min,酶标二抗最佳稀释度为1∶ 500,孵育时间为30 min,最佳底物显色时间为20 min,OD450值≥0.3判定为阳性。该方法具有 良好的特异性、敏感性和重复性,对水禽呼肠孤病毒基因Ⅰ型和基因Ⅱ型血清具有一定的交叉 反应。对105份临床健康鹅群血清样品进行检测,阳性率高达77.33%。该研究提供了一种敏 感高效的快速检测水禽呼肠孤病毒中和抗体的方法,为鹅群临床血清大规模检测提供方法, 为研发商品化的ELISA检测试剂盒提供基础。
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